Hjälp utvecklingen av webbplatsen och dela artikeln med vänner!

PCR är ett test som har använts för att diagnostisera många sjukdomar. PCR-metoden gör det möjligt att visa den direkta närvaron av bakterier i organismen, och specifikt dess DNA. PCR används bl.a vid diagnos av borrelia. Vad är PCR-tekniken? Vad är re altids-PCR?

Innehåll:

  1. PCR (test) - vad är PCR-tekniken?
  2. PCR (test) - tillämpning av PCR-metoden
  3. PCR (test) - borrelia
  4. PCR (test) - resultat. Kan de vara falska positiva?
  5. PCR (test) - resultat. Kan de vara falsknegativa

PCR(polymeraskedjereaktion) är den primära metoden som används i genetiska och molekylära laboratorier. Den utvecklades 1983 av Kara Mullis, som tilldelades Nobelpriset 1993 för det.

PCR (test) - vad är PCR-tekniken?

PCR-testbestår av multipel amplifiering (vanligtvis i 30-40 cykler) av ett specifikt fragment av DNA, t.ex. gener som kodar för Borrelia-proteiner, med användning av polymerasenzymet.

Sedan, för att visualisera det amplifierade DNA-fragmentet, används speciella molekylära färgämnen. PCR, tack vare amplifieringen av specifika DNA-fragment, är en ultrakänslig metod

I PCR-metoden amplifieras DNA-fragment med användning av specifika primerpar för en given region av bakteriens DNA. Till exempel är PCR-målregioner som används vid diagnos av borrelia gener som kodar för proteiner, t.ex. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA.

Det biologiska materialet från vilket testet kan utföras är:

  • blod
  • hudsektion från migrerande erytem
  • cerebrospinalvätska
  • led- eller broskvätska
  • urin

PCR (test) - tillämpning av PCR-metoden

Förutom diagnosen borrelia kan PCR-metoden detektera specifika DNA-fragment från andra mikroorganismer eller människor. Därför används PCR-metoden även i:

  • diagnos och övervakning av virusinfektioner: herpesvirus (herpesvirus, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitvirus (HBV och HCV)
  • diagnos och övervakning av bakterieinfektioner, särskilt de bakterier,som inte kan identifieras genom kulturer, t.ex. tuberkulos
  • diagnos och övervakning av neoplastiska sjukdomar: leukemi, bröstcancer, kolorektal cancer, lungcancer
  • diagnos av cancerpredisposition: bröst- och äggstockscancer (BRCA1- och BRCA2-gener), kolorektal cancer (APC- och CHEK2-gener)
  • diagnos av genetiska sjukdomar: hemokromatos (HFE-gen), talassemi (HBA1- och HBA2-gener), celiaki (HLA-gener)
  • faderskapstester, som upptäcker DNA-kompatibiliteten hos barnet och pappan
Värt att veta

För närvarande finns det många modifieringar av PCR-metoden. Till exempel, vid diagnos av borrelia, används huvudsakligen metoderna för kapslad PCR (kapslad PCR) och re altids-PCR ( ). Den senare är en kvantitativ metod och gör det möjligt att bestämma det exakta antalet Borrelia DNA-kopior i det testade biologiska materialet

PCR (test) och borrelia

Grunden för diagnosen borrelia är serologisk testning. Det finns dock kliniska situationer som kan göra att dessa tester är falsknegativa:

  • serologiskt fönster, dvs. den initiala infektionsperioden då kroppen ännu inte producerar specifika IgM- och IgG-antikroppar mot Borrelia
  • hos personer med nedsatt immunförsvar som inte producerar tillräckligt med antikroppar
  • närvaro av immunkomplex som består av Borrelia-antigener och specifika antikroppar för dem och förhindrar upptäckt av antikroppar med serologiska metoder

Om patienten misstänks ha symtom på borrelia och de serologiska testresultaten är negativa, kan ett molekylärt test baserat på PCR-metoden utföras

DNA från Borrelia-spiroketer kan detekteras i de tidiga stadierna av infektion, eftersom antalet spiroketer i kroppsvätskor då är högst.

Vid diagnos av borrelia används i första hand serologiska metoder som ELISA, men i vissa kliniska situationer är genetisk testning med PCR-metoden till hjälp.

Ju längre tid det tar från infektion, desto lägre är sannolikheten för att upptäcka bakteriellt DNA. Därför, i vissa fall, innan PCR-testet utförs, odlas bakterier på speciella medier i 1-2 veckor och sedan utförs testet.

Detta tillvägagångssätt används vid misstanke om borrelia och insamlad cerebrospinalvätska. I den sena fasen av infektionen är det lämpligare att utföra ett ELISA-test

PCR-metoden bör inte användas vid rutindiagnostik av borrelia på grund av bristen på standardiseringangående förekomsten av Borrelia burgdorferi-sorter i Polen

Men i fallet med svårigheter att ställa diagnos (särskilt i det tidiga skedet av sjukdomen), är resultatet av PCR-testet till hjälp i den diagnostiska processen.

Ett positivt testresultat betyder att närvaron av Borrelia burgdorferi DNA och dess varianter upptäcktes i det testade materialet, men det förklarar inte om organismen är aktivt infekterad. Å andra sidan utesluter inte ett negativt resultat förekomsten av bakterier i kroppen

Vissa laboratorier erbjuder tester för förekomst av Borrelia-DNA i fästingen. Men resultatet av ett sådant test är inte grunden för diagnosen borrelia hos en biten person.

PCR - resultat. Kan de vara falska positiva?

PCR är en ultrakänslig metod och samtidigt mycket känslig för kontaminering. Därför är det mycket viktigt i PCR-baserad testning att välja en lämplig intern kontroll för att utesluta falskt positiva resultat.

Korrekt insamling av material för tester samt erfarenheten och tillförlitligheten hos den diagnostiker som utför testet är också av avgörande betydelse.

PCR - resultat. Kan de vara falsknegativa

Som i alla laboratorietest, även i PCR-metoden, kan falskt negativa resultat visas. Här är det avgörande att samla in blod för ett lämpligt antikoagulantia, eftersom vissa av dem, såsom heparin, kan hämma PCR-reaktionen.

Att samla in material efter påbörjad antibiotikabehandling kan minska effektiviteten av PCR-reaktionen och öka sannolikheten för falsknegativa resultat.

Man bör också komma ihåg att Borrelia-bakterier lever mycket kort tid i blodet och kroppsvätskorna, eftersom de tack vare speciella receptorer mycket snabbt tränger in i "svårtillgängliga" platser i kroppen.

Därför, i motsats till diagnostiken för andra mikroorganismer, är antalet Borrelia-spiroketer i biologiskt material litet, ibland till och med vid gränsen för detektion av PCR-metoden. Detta kan också orsaka en falsk negativ.

Referenser

  1. Dunaj J. et al. Betydelsen av PCR-metoden vid diagnos av borrelia. Bläddra Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
  2. Laboratoriediagnostik av fästingburna sjukdomar Arbetsgruppens rekommendationer: National Chamber of Laboratory Diagnosticians, National Institute of Public He alth-National Institute of Hygiene, Nationell konsult inom området infektionssjukdomar, Institutionen för infektionssjukdomar och neuroinfektioner , Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014.
  3. Ružić-Sabljić E. och Cerar T. Framsteg i den molekylära diagnosen av borrelia. Expert Rev Mol Diagn. 2022jan; 17 (1): 19-30.
  4. Valones M.A.A. et al. Principer och tillämpningar av polymeraskedjereaktion inom medicinska diagnostiska områden: en översikt. Braz J Microbiol. 2009 Jan-Mar; 40 (1): 1-11.
Om författarenKarolina Karabin, MD, PhD, molekylärbiolog, laboratoriediagnotiker, Cambridge Diagnostics PolskaEn biolog till yrket, specialiserad på mikrobiologi, och en laboratoriediagnotiker med över 10 års erfarenhet av laboratoriearbete. Utexaminerad från College of Molecular Medicine och medlem av Polish Society of Human Genetics. Chef för forskningsanslag vid Laboratory of Molecular Diagnostics vid institutionen för hematologi, onkologi och inre sjukdomar vid Warszawas medicinska universitet. Hon försvarade titeln doktor i medicinska vetenskaper inom området medicinsk biologi vid 1:a medicinska fakulteten vid det medicinska universitetet i Warszawa. Författare till många vetenskapliga och populärvetenskapliga verk inom laboratoriediagnostik, molekylärbiologi och nutrition. Till vardags driver han som specialist inom området laboratoriediagnostik innehållsavdelningen på Cambridge Diagnostics Polska och samarbetar med ett team av nutritionister på CD Dietary Clinic. Han delar med sig av sin praktiska kunskap om diagnostik och kostterapi av sjukdomar med specialister på konferenser, utbildningar och i tidningar och webbplatser. Hon är särskilt intresserad av den moderna livsstilens inflytande på molekylära processer i kroppen.

Hjälp utvecklingen av webbplatsen och dela artikeln med vänner!

Kategori:

Forskning