ELISA-testet upptäcker många sjukdomar, vilket är anledningen till att det har använts flitigt inom medicin och mer. ELISA-testet är dock mest känt för sin diagnos av borrelia. Vad är ELISA-testet? Hur ska man tolka resultaten? Vad kostar testet?

Innehåll:

  1. ELISA-test – vad upptäcker det? Användning av ELISA
  2. ELISA-test - vad är testet?
  3. ELISA-test och borrelia – när ska man utföra?
  4. ELISA-test - pris. Hur mycket kostar ett ELISA-test?
  5. ELISA-test - resultat. Kan de vara falska positiva?
  6. ELISA-test - resultat. Kan de vara falskt negativa?

ELISA-test , det vill säga den enzymkopplade immunosorbentanalysen, är en vanlig laboratoriemetod som tjänar bl.a. för kvantitativ detektion av antikroppar i blodet

På grund av dettaELISA-testhittadesapplikationvid diagnos av bakteriella sjukdomar, såsomborrelia med Lyme.

Fördelen med ELISA-metoden är dess enkelhet, snabba utförande och höga känslighet. ELISA-metoden utförs med hjälp av speciella plastplattor med brunnar fyllda med t ex Borrelia-proteiner (antigener) och specifika monoklonala antikroppar, som är designade för att detektera antikroppar i patientens prov.

ELISA-test – vad upptäcker det? Användning av ELISA

Den höga känsligheten och enkelheten hos ELISA-metoden gjorde den användbar vid diagnos av många sjukdomar, men den är mest känd som den diagnostiska metoden för borrelia.

Vid diagnos av borrelia, den så kallade indirekt ELISA, som gör det möjligt att detektera specifik IgM eller IgG i det testade materialet. På samma sätt kan antikroppar detekteras för diagnostiska ändamål:

  • virusinfektioner: herpesvirus (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitvirus (HBV och HCV)
  • protozoinfektioner: toxoplasmos, giardiasis
  • autoimmuna sjukdomar: celiaki (anti-tTG eller anti-DPG antikroppar), Hashimotos sjukdom (anti-TG och anti-TPO antikroppar), inflammatoriska tarmsjukdomar (anti-ASCA och anti-ANCA antikroppar)
  • parasitsjukdomar och allergier,där specifika IgE-antikroppar detekteras. Deras ökade nivå kan indikera närvaron av allergier, t.ex. mot pollen och mat, eller parasitiska invasioner (beväpnad bandmask, mänsklig rundmask)

Det finns också modifieringar av ELISA-metoden (så kallad sandwich ELISA), som tillåter detektering av ett testat prov av andra proteiner än antikroppar. Sedan är syftet med forskningen att i det biologiska materialet upptäcka:

  • fragment av virus eller bakterier, oftast är dessa antigener specifika för en given patogen
  • serumhormoner, t.ex. östrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortisol
  • enzymer t.ex. kalprotektin, pankreaselastas, alkaliskt fosfatas
  • tumörmarkörer, t.ex. CA-125
  • förekomst av droger i serumet

Den här metoden används även inom livsmedelsindustrin, där spårmängder av allergener (t.ex. mjölk, jordnötter), GMO eller gifter i livsmedel kan upptäckas.

ELISA-test - vad är detta test?

Diagnosen av t ex borrelia med hjälp av ELISA-metoden består i att detektera immunproteiner i biologiskt material - antikroppar som uppstår under responsen mot Borrelia-antigener.

Antikroppar testas i två klasser, IgM och IgG. IgM är de första antikropparna som dyker upp i kroppen vid kontakt med bakterier och som avtar med tiden.

Deras plats tas av mer ihållande IgG-antikroppar som kan stanna i kroppen i flera dussin år.

På detta sätt testas förekomsten av bakterier i kroppen indirekt genom att detektera antikroppar specifikt riktade mot Borrelia-spiroketer.

Antikroppar i olika stadier av infektion kan riktas mot en mängd olika Borrelia-proteiner. Till exempel, i ett tidigt skede är det proteinet p41.

I de senare stadierna börjar fler och fler proteiner dyka upp, som p21, p30, p39, p43. Det är därför det är extremt svårt att diagnostisera borrelia.

Valet av bakterieproteiner är extremt viktigt för att testet ska ha ett högt diagnostiskt värde. Därför bör rutinmässigt vid diagnos av borrelia, II-generation eller III-generation ELISA-tester användas, i vilka uppsättningarna av proteiner väljs för att erhålla det mest tillförlitliga resultatet.

ELISA-test och borrelia. När ska man uppträda?

Lyme borrelios är en bakteriell sjukdom som orsakas av bakterien Borrelia burgdorferi och dess många varianter.

Sjukdomsdiagnostik är inte lätt på grund av komplexiteten i immunsvaret mot Borrelia och bristerna i laboratoriemetoder

Den mest använda laboratoriemetoden är den mycket känsliga ELISA-metoden som detekterar specifika antikroppar mot bakteriella proteiner

Vid diagnos av borrelia används en indirekt ELISA-metod där följande stadier särskiljs:

  • inkubation av brunnarna på plattan med material som samlats in från patienten, t ex serum. Om det finns antikroppar mot Borrelia i det testade materialet binder de till proteiner i botten av reaktionsbrunnen
  • sedan sköljs överskottsserumet ur med en speciell tvättvätska (buffert) och s.k. konjugat, dvs en antikropp kopplad till ett enzym som binder till tidigare kopplade antikroppar i reaktionsbrunnarna
  • Substrat för konjugatet läggs till senare och det finns ingen (positiv) eller ingen färgreaktion (negativ)
  • det sista steget är avläsningen av läsaren (spektrofotometer) av koncentrationen av antikroppar mot Borrelia i patientens serum

ELISA-metoden för borrelia utförs med blod och vid neurologiska symtom (neuroborrelios), även med cerebrospinalvätskan

Ledvätskan bör inte testas eftersom det finns stor sannolikhet för falskt positiva resultat.

Grunden för diagnosen av sjukdomen är kliniska symptom som indikerar den, bekräftade av resultaten av laboratorietester

Tillägget av ett laboratorietestresultat utan närvaro av symtom godkänner inte diagnosen borrelia, eftersom det har visat sig att antikroppar mot Borrelia-spiroketer även upptäcks hos friska människor.

Serologisk diagnos av borrelia börjar med ett semikvantitativt ELISA-screeningstest. Om resultatet är negativt betyder det att inga Borrelia-spiroketer har upptäckts eller att resultatet är falsknegativt.

Om resultatet är positivt eller svagt positivt (tvetydigt), bekräftande Western blot-testning, som är mycket specifik

Detta är för att bekräfta "sanningen" av resultaten som erhållits med ELISA-metoden. Under diagnostik kan du inte hoppa över något av ovanstående steg och till exempel utföra diagnostik med Western blot-metoden eller ställa en diagnos baserad på ett positivt resultat endast med hjälp av ELISA-metoden

I Polen slutar diagnosen av borrelia mycket ofta vid det första screeningsstadiet, vilket orsakar en misstolkning av positiva eller svagt positiva resultat.

Värt att veta

ELISA-test - pris. Hur mycket kostar ett ELISA-test?

Testet kostar runt 60zloty och görs direkt. Du kan dock vänta cirka tre månader på resultatet av remissen.

ELISA-test - resultat. Kan de vara falska positiva?

Falskt positiva resultat är resultatet av korsreaktiviteten mellan IgM-antikroppar och andra proteiner. Antikroppar som produceras av kroppen kan "felaktigt" känna igen ett antigen från andra mikroorganismer som Borrelia-antigenet.

De vanligaste "misstagen" uppstår hos personer infekterade med treponema pallidum, herpesvirus och hos personer med systemisk lupus erythematosus och andra reumatiska sjukdomar.

ELISA-test - resultat. Kan de vara falskt negativa?

Falskt negativa resultat kan dyka upp i ett tidigt skede av infektion, sedan bör testet upprepas efter cirka 3-4 veckor. Det här kallas serologiskt fönster, d.v.s. den initiala infektionsperioden då kroppen ännu inte har "lyckats" producera specifika antikroppar.

På liknande sätt hos personer med nedsatt immunförsvar som inte bildar tillräckligt med antikroppar

Ett stort problem, särskilt vid mycket intensiva infektioner, är utseendet på den så kallade immunkomplex som består av Borrelia spirochetes-antigener och specifika antikroppar för dem.

Detta gör antikropparna "osynliga" för vanliga metoder som ELISA, och även om de finns i det testade materialet kan de inte detekteras.

I sådana fall kan laboratoriet använda sig av att bryta ner immunkomplex. Denna behandling är utformad för att frigöra antikropparna. Denna metod används dock inte i stor utsträckning på grund av bristen på standardisering i laboratorier.

Värt att veta

Varför är det inte lätt att diagnostisera borrelia?

Detta beror på komplexiteten i immunsvaret mot Borrelia och begränsningarna hos laboratoriemetoder. Mångfalden av sorter och uppkomsten av nya infektioner som orsakar infektioner, särskilt på den europeiska kontinenten, underlättar inte utvecklingen av effektiva diagnostiska metoder

Fler sorter har nyligen dykt upp i Europa, som Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana och Borrelia spielmanii. Dessutom kan Borrelia-spiroketer i kroppen förvandlas till cystor eller stanna på platser i kroppen som är oåtkomliga för immunsystemets celler.

Att vara "osynlig" för immunsystemet. Dessutom har det visat sig att vävnaderna kan innehålla fragment av bakterier som har starkt pro-inflammatoriska egenskaper. De tros vara ansvariga för de kroniska symtomen på borrelia, trots negativa resultat i studienlaboratorium.

Referenser

1. Witecka-Knysz E. et al. Borrelia: varför är diagnosen så svår? Laboratoriediagnotiker april 2007.2. Moore A. et al. Aktuella riktlinjer, vanliga kliniska fallgropar och framtida anvisningar för laboratoriediagnostik av borrelia, USA. Emerg Infect Dis. 2016 juli, 22 (7) .3. Laboratoriediagnostik av fästingburna sjukdomar. Arbetsgruppens rekommendationer: National Chamber of Laboratory Diagnostics, National Institute of Public He alth-National Institute of Hygiene, Nationell konsult inom området infektionssjukdomar, Institutionen för infektionssjukdomar och neuroinfektioner, Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) From A to Z. Springer 2022.

Om författarenKarolina Karabin, MD, PhD, molekylärbiolog, laboratoriediagnotiker, Cambridge Diagnostics PolskaEn biolog till yrket, specialiserad på mikrobiologi, och en laboratoriediagnotiker med över 10 års erfarenhet av laboratoriearbete. Utexaminerad från College of Molecular Medicine och medlem av Polish Society of Human Genetics. Chef för forskningsanslag vid Laboratory of Molecular Diagnostics vid institutionen för hematologi, onkologi och inre sjukdomar vid Warszawas medicinska universitet. Hon försvarade titeln doktor i medicinska vetenskaper inom området medicinsk biologi vid 1:a medicinska fakulteten vid det medicinska universitetet i Warszawa. Författare till många vetenskapliga och populärvetenskapliga verk inom laboratoriediagnostik, molekylärbiologi och nutrition. Till vardags driver han som specialist inom området laboratoriediagnostik innehållsavdelningen på Cambridge Diagnostics Polska och samarbetar med ett team av nutritionister på CD Dietary Clinic. Han delar med sig av sin praktiska kunskap om diagnostik och kostterapi av sjukdomar med specialister på konferenser, utbildningar och i tidningar och webbplatser. Hon är särskilt intresserad av den moderna livsstilens inflytande på molekylära processer i kroppen.

Kategori:

Forskning